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Clostridium phytofermentans木糖异构酶基因的表达及酶学性质研究

9847字 26页 原创作品，已通过查重系统


摘 要
乙醇作为可再生绿色能源具有很大的利用价值。在生物质降解物中，木糖占有相当大的比例。木糖异构酶是利用木糖生产乙醇的关键酶，其对提高木糖利用率以及降低乙醇发酵成本具有重要的作用。
论文利用实验室已经鉴定的重组质粒pSE380-xylA转化大肠杆菌JM109，以使目的基因得到表达。SDS-PAGE蛋白质分析表明，重组菌株与对照菌株相比，有非常明显的49 kDa左右的特征蛋白条带出现，表达量比较大，重组蛋白的分子量大小与核酸序列理论推算的蛋白质分子量相符，目的片段在大肠杆菌JM109中获得了表达。SDS-PAGE扫描分析重组酶占总蛋白的21%左右。通过镍柱亲和层析及Sephacral S-300分子筛纯化了重组Clostridium phytofermentans木糖异构酶，SDS-PAGE电泳结果表明有非常单一的蛋白条带出现，分子量约为49 kDa；测定了重组酶的酶学性质，结果显示，纯化倍数达10.9，重组酶的比活力达25.0U/mg。重组酶的最适pH为8.0，最适反应温度为37 ℃。该研究可为以木糖为原料的乙醇生物法生产提供有益参考。


关键词：乙醇；Clostridium phytofermentans；木糖异构酶；表达；酶学性质